A interação do alaranjado G com proteína foi investigada pela técnica de voltametria. O alaranjado G, em solução tampão Britton-Robinson (B-R), pH 2,0, mostrou um pico voltamétrico irreversível de redução, a -0,17V (vs. SCE) utilizando mercúrio como eletrodo de trabalho. A adição de albumina de soro humano (HSA) à solução de alaranjado G, resultou no decréscimo do pico de corrente de redução, aparentemente sem variações dos portenciais de pico e sem o surgimento de novos picos de corrente. Os parâmetros eletroquímicos da solução de alaranjado G, na ausência e presença de HSA, foram calculados e comparados. Os resultados mostraram que não ocorreram variações significantes, indicando que o comportamento eletroquímico da solução reacional utilizando mercúrio como eletrodo de trabalho não variou e que foi formado um biocomplexo supramolecular, eletroquimicamente inativo. O mecanismo de interação foi devido à formação do campo microeletrostático na estrutura da albumina em solução aquosa, causando a interação com o alaranjado G, o que induziu o decréscimo da concentração de equilíbrio do alaranjado G na solução reacional, e o decréscimo do pico de corrente de redução. As condições de interação foram discutidas cuidadosamente. Sob condições ótimas, o decréscimo do pico de corrente foi proporcional à concentração da proteína e posteriormente, usado para a determinação de diferentes tipos de proteínas. As curvas de calibração para a determinação de HSA, albumina de soro bovino (BSA), ovalbumina (OVA), hemoglobina bovina (BHb) e lipase, foram lineares nos intervalos de 4,0~28,0 mg L-1, 4,0~30,0 mg L-1, 2,0~20,0 mg L-1, 2,0~25,0 mg L-1 e 2,0~30,0 mg L-1, respectivamente. O limite de detecção foi 3,0 mg L-1 para HSA, 3,5 mg L-1 para BSA, 1,0 mg L-1 para OVA, BHb e lipase. O novo método eletroquímico estabelecido foi aplicado para determinar o teor de albumina em amostras de soro humano sadio e os resultados apresentaram boa concordância com o tradicional método espectrofotométrico Coomassie Brilliant Blue (GBB G-250).
The interaction of orange G with protein was investigated by voltammetric method in this paper. In pH 2.0 Britton-Robinson (B-R) buffer solution orange G displayed an irreversible voltammetric reduction peak at -0.17 V (vs. SCE) on mercury working electrode. The addition of human serum albumin (HSA) into the orange G solution resulted in the decrease of the reduction current peak apparently without the changes of peak potentials and no new peaks appeared. The electrochemical parameters of orange G solution in the absence and presence of HSA were calculated and compared. The results showed that there were no significant changes, which indicated that the electrochemical behaviors of reaction solution on the mercury working electrode showed no changes and a supramolecular electrochemical inactive biocomplex was formed. The interaction mechanism was due to the formation of the microelectrostatic field in albumin structure in aqueous solution and caused the interaction with orange G, which induced the decrease of the equilibrium concentration of orange G in the reaction solution, and the decrease of the reductive peak current. The interaction conditions were discussed carefully. Under the optimal conditions the decrease of peak current was proportional to the concentration of protein and further used to the determination of different kinds of proteins. The calibration curves for the determination of HSA, bovine serum albumin (BSA), ovalbumin (OVA), bovine hemoglobin (BHb), lipase were linear over the ranges of 4.0~28.0 mg L-1, 4.0~30.0 mg L-1, 2.0~20.0 mg L-1, 2.0~25.0 mg L-1, 2.0~30.0 mg L-1, respectively. The detection limit was 3.0 mg L-1 for HSA, 3.5 mg L-1 for BSA, 1.0 mg L-1 for OVA, BHb and lipase. The new established electrochemical method was applied to determine the content of albumin in healthy human serum samples and the results were in good agreement with the traditional Coomassie Brilliant Blue (GBB G-250) spectrophotometric method.
